تمكن مشروع بحثي على مستوى الدكتوراه في قسم علوم الحياة في كلية العلومبجامعة بابل اعدته الباحثة سارة كريم كاظم الزبيدي باشراف الاستاذ الدكتور جواد كاظم الجنابي والاستاذ الدكتور عدنان حمد الحمداني من تسجيل سلالات جديدة في البنك الجيني العالمي لاحد الفطريات الجلدية ذات الاهمية الكبيرة في احداث الامراض الجلدية في محافظة بابل والمسمى بفطر Trichophyto rubrum والتي تم تسجيلها في الموقع العالمي للمعلومات الوراثية (NCBI) والشجرة التطورية للعزلات المحلية، حيث تم تسجيل خمس عزلات محلية اعطيت ترقيم دولي لبنك المعلومات الوطنية للجينات وبنك المعلومات الاوربية وبنك DNA الياباني, وهذه الارقام تحمل التسلسلات KP979787, KP979788, KP979789, KP979790 و KP979791. اما الشجرة التطورية للعزلات المحلية بالمقارنة مع بعض العزلات العالمية المسجلة فأظهرت ان العزلات المحلية تماثل بشكل كبير (99%) العزلة العالمية (GQ376105.1).
وبين استاذ فسلجة الفطريات الدكتور جواد كاظم الجنابي ان هذا المشروع الموسوم "دراسة النمو، الفعالية الانزيمية والتعبير الجيني لانزيمات البروتيز في الفطر الجلدي Trichophyton rubrum" يعد اول دراسة علمية في العراق تعتمد التسلسل النيكلوتيدي لتسجيل التسلسلات في الموقع العالمي للمعلومات الوراثية (NCBI) والشجرة التطورية الوراثية للعزلات المحلية مع العزلات العالمية للفطر T. rubrum. مضيفا ان المشروع جاء على ضوء بحث سابق كنت قد اشرفت عليه العام الماضي حول انتشار بعض الفطريات الجلدية في مدينة الحلة وضواحيها والذي ركز على احد الفطريات ذات الاهمية الاكبر في احداث الامراض الجلدية وهو فطر Trichophyto rubrum حيث تم فيه دراسة تشخيص السلالات التابعة لهذا المرض وظروف نموها وتكاثرها ودراسة الجينات ذات العلاقة بهذا الانزيم.
مؤكدا ان هذا المشروع يعد من المشاريع الرائدة الذي تم فيه تسجيل هذه السلالات في البنك الجيني العالمي كما تم نشر بحثين من الاطروحة في مجلات عالمية ذات معامل تاثير واسع وايضا هناك بحث آخر سيتم نشره في مجلة عالمية.مبينا ان دائرة البحث والتطوير في وزارة التعليم العالي خصصت نحو (40) مليون دينار لتوفير نفقات البحث والاجهزة المختبرية اللازمة التي تم شرائها لهذا الغرض. من جانبها بينت الباحثة الدكتورة سارة كريم الزبيدي ان المشروع الريادي صمم لتوصيف الانماط الجزيئية والمظهرية للنمو والفعالية الانزيمية للانزيم المحلل للبروتين والتنوع الوراثي وعلاقته بالتعبير الجيني بين عزلات الفطر الجلدي .Trichophyto rubrum ولهذا الغرض تم جمع 150 عينة سريرية (قشطات جلدية (80), اجزاء شعر (60) وقضمات اظافر (10)) من 100 مريض مصاب بداء السعفة بعد مراجعتهم لمركز الامراض الجلدية والزهرية لمستشفى مرجان التعليمي والعيادات الاهلية في محافظة بابل للمدة من شباط 2014 ولغاية ايار 2014. حيث تم عزل وتشخيص الفطر T. rubrumباستخدام الطرق الزرعية والاختبارات الفسيولوجية, بعدها تم تأكيد التشخيص باستخدام تقنية تفاعل سلسلة البلمرة (PCR) والتنميط الجيني باستخدام تقنية RFLP PCR والتتابع النيكلوتيدي Sequencing وتسجيل تلك التشابهات في الموقع العالمي لمعلومات الجينات (NCBI) لغرض الحصول على ارقام ومن ثم اجراء الشجرة التطورية Phylogeny.
مضيفة انه تم اختبار ظروف النمو, والفعالية المحللة للبروتين والظروف المثلى لها في الاوساط الزرعية الصلبة والسائلة للفطر T. rubrum, فضلا عن تحديد التعبير الجيني للانزيم المحلل للبروتين (Protease) الخارجية والداخلية (Aminopeptidase) باستخدام تقنية تفاعل سلسلة البلمرة بالوقت الحقيقي (Real-Time PCR) وقد اظهرت نتائج العزل والتشخيص ان من مجموع 150 عينه, كانت 24 (16%) منها تعود للفطريات الجلدية (Dermatophytes), وكان 8 (33.4%) عزلات منها تعود للفطر الجلدي T. rubrum. كما اظهرت نتائج تأثير الظروف الزرعية في نمو الفطر T. rubrum ان درجة الحرارة 30°م واس هيدروجيني 6 والوسط سابرويد اكار و7 أيام من الحضن هي الظروف المثلى للنمو. واظهرت عزلات الفطر T. rubrum فعالية تحللية للبروتين من خلال قدرتها العالية على انتاج الانزيم المحلل للبروتين Protease في الوسط الزرعي الصلب والسائل بعد 14 يوم من الحضن واختلفت هذه الفعالية تبعا الى نوع العزلة الفطرية حيث ان العزلة رقم (1)المعزولة من الجلد أعطت فعالية عالية لتحلل البروتين (5.6سم) في الوسط الصلب و (80 وحدة/مل) في الوسط السائل بالمقارنة مع العزلات المختبرة الأخرى (عزلة 2-8). من جانب اخر, كانت فترة 9 أيام من الحضن ودرجة الحرارة 30°م واس هيدروجيني 7 وتركيز المادة الخاضعة 0.5% هي الظروف المثلى للفعالية التحللية للبروتين للعزلات المختبرة.
وتابعت حديثها بالقول: اكدت الاختبارات الجزيئية ان كل العزلات المختبرة تعود الى الفطر الجلدي T. rubrum وبحجم جزيئي 601 زوج قاعدة لنتائج التضخيم لبادئات منطقة ITS1 باستخدام تقنية تفاعل سلسلة البلمرة PCR. بينما اظهرت تقنية RFLP PCR وجود نمطين جينيين (Genotypes) هي (I و II) تعود الى النوع T. rubrum. وقد تم قياس التعبير الجيني النسبي للانزيمات المحللة للبروتين (البروتيز الخارجي والامينوببتايديز الداخلي) المنتجة من الانماط الجينية للفطر T. rubrum باستخدام تقنية تفاعل سلسلة البلمرة المتعدد بالوقت الحقيقي بعد تضخيم الجين المستهدف والمشفر لانزيم البروتيز والامينوببتايديز وبالمقارنة مع الجين المحافظ (Housekeeping gene, ?-actin) كجين مرجعي. وقد اظهرت النتائج وجود تنظيم عالي للجين المشفر للانزيم المحلل للبروتين الخارجي (Exocellular protease) وتنظيم واطئ للجين المشفر للانزيم المحلل للبروتين الداخلي (Endocellular aminopeptidase) والمنتجة من الفطر T. rubrum وبوجود الكازائين كمادة خاضعة.مبينة انه تم استخدام منطقة الاستنساخ الداخلية-1 والتتابع الجزيئي والجين المشفر لل RNA 5.8S الرايبوسومي ومنطقة الاستنساخ الداخلية-2 والتتابع الكامل والجين المشفر لل RNA 28S الرايبوسومي والتتابع الجزيئي للعزلات المحلية للفطر T. rubrum لغرض التعرف على تسلسل النيكلوتيدات.
متابعة/عادل الفتلاوي/اعلام الجامعه
|