مفهوم التخفيف

مفهوم التخفيف
1- الهدف:
دراسة مفهوم التخفيف و تطبيقاته في تحضير الكواشف المصلية و كمتطلب اولي لتحديد العيار، من تطبيقات التخفيف هي :
ا- تحديد تركيز البروتين الكلي.
2- تحديد تركيز الكلوبيولين المناعي.
3- تحديد تركيز المواد الحيوية في مصل الدم.
4- تحديد العيار.
5- دراسة منحني المعايره و تحديد التناسب الامثل بين الضد و المستضد.
2- الاساس العلمي:
التخفيف هو التقليل المتسلسل لتركيز الماده في المحاليل او في السوائل الجسمية و هنالك ثلاث اساليب للتخفيف:
التخفيف الثنائي
التخفيف العشاري الثنائي
التخيف العشاري
3- المواد و الادوات
1- الامصال او المستضدات
2- المحلول الملحي الفسلجي
3- انابيب التخيف
4- مساند انابيب
5- شريحه بلاستيكية ذات حفر
6- ماصة دقيقة مع رؤوس بلاستيكية


4- طريقة العمل
ا- التخفيف الثنائي
1- نأخذ ثمانية من الانابيب و نرقمها من 1 الى 8.
2- ناخذ كمية 0.5 ml من المحلول الملحي بتركيز 0.85 % و نضعها في كل من الانابيب الثمانية المرقمة.
3- ننقل 0.5 ml من المصل او المستضد المراد تخفيفه الى الانبوبه رقم (1) و يرج الانبوب جيدا او يسحب و يعاد محتوى الانبوبة مع المخفف لاكثر من مرة بواسطة الماصة.
4- بواسطة ماصة دقيقة ينقل 0.5 ml من الانبوبة الاولى و يضاف للثانية و يمزج بالسحب والاعادة المتكررة بالماصة ثم ينقل الى الانبوبة الثانية و تعاد عملية الممازجة ثم ينقل الى الانبوبة الثالثة وتعاد العملية السابقة حتى الانبوبة الثامنة تمزج و يسحب 0.5 ml المخفف و يترك خارجا.
ب- التخفيف العشاري الثنائي
1- ناخذ ثمانية انابيب و نرقمها من 1-8 .
2- ناخذ كمية 0.9 ml من المحلول الملحي و نضعها في الانبوبة الاولى و كمية 0.5 ml من المحلول الملحي لكل من الانابيب 2-8.
3- نضيف 0.1 ml من المصل الى الانبوبة الاولى ونمازجها مع المخفف بالسحب و الاعادة ثم نأخذ 0.5 ml و نضيفها للانبوبة الثانية.
4- تعاد عملية التخفيف كما في الخطوة الرابعة من الفقرة أ
ج- التخفيف العشاري
1- نأخذ ثمانية من الانابيب و نرقمها من 1 الى 8.
2- ناخذ كمية 0.9 ml من المحلول الملحي بتركيز 0.85 % و نضيفها لكل من الانابيب الثمانية المرقمة.
3- نضيف 0.1 ml من المصل او المستضد المراد تخفيفه الى الانبوبه رقم (1) و يرج الانبوب جيدا او يسحب و يعاد محتوى الانبوبة مع المخفف لاكثر من مرة بواسطة الماصة.
4- ننقل 0.1 ml من الانبوبة الثانية حتى الانبوبة الثامنة كما في الخطوة الرابعة من الفقرة أ.


د- التخفيف بالشريحة البلاستيكية ذات الحفر:
يمكن تنفيذ التخيف الثنائي و العشاري ثنائي في الشريحه البلاستيكية ذات الحفر بحجم 50µ لكل من المخفف و المصل.
ملاحظات
1- اسلوب التخفيف
التخفيف الثنائي حجم واحد مادة / حجم واحد مخفف
التخفيف العشاري الثنائي حجم واحد مادة / 9حجم مخفف ثم حجم واحد مادة / حجم واحد مخفف
التخيف العشاري حجم واحد مادة / 9حجم مخفف
2- التركيز
ا- التخفيف الثنائي 2:1 4:1 8:1 16:1 32:1 64:1 128:1
ب- التخفيف العشاري الثنائي 10:1 20:1 40:1 80:1 160:1 320:1 640:1
ج- التخفيف العشاري ?10?^1:1 ?10?^2:1 ?10?^3:1 ?10?^4:1 ?10?^5:1 ?10?^6:1 ?10?^7:1

3- التخفيف و العيار في المفهوم المصلي عند التفاعل:
التخفيف الثنائي 2 4 8 16 32 64 128
التخفيف العشاري الثنائي 10 20 40 80 160 320 640
التخيف العشاري ?10?^1 ?10?^2 ?10?^3 ?10?^4 ?10?^(5 ) ? 10?^6 ? 10?^7