تحضير المستضدات

الهدف:
معرفة الطرق الاساسية في تحضير بعض المستضدات المهمة مثل بعض مستضدات الخلايا الحمراء و بعض المستضدات البكترية.
الاساس العلمي:
ابسط منهجيات تحضير المستضدات هي تحضير المستضدات الخلوية الكاملة مثل تحضير مستضدات الخلايا الحمراء او المستضد الجسمي للخلية البكترية. حيث تتطلب عملية تحضير المستضدات جمع وغسل وتحديد الاعداد ثم تثبيت الفعل الحيوي و من ثم اثبات العقمة.
طريقة تحضير مستضدات الخلايا الحمراء للانسان:
1- يسحب كمية من الدم من الوريد العضدي مع مانع تجلط (5مل).
2- يمزج الدم مع مانع التجلط ثم يؤخذ كمية 2 مل ويرسب في جهاز المنبذ عند سرعة 2500 دورة/دقيقة.
3- يغسل راسب المكونات الخلوية بمحلول فسيولوجي لثلاث مرات عند سرعة 2500 دورة/دقيقة.
4- تعلق الخلايا الحمراء المغسولة بحيث تشكل نسبة 5% مع المحلول الفسيولوجي المعقم.
5- يمكن استخدامها كمستضد للتمنيع في غضون ثلاث ايام في الثلاجة بعدها لايصلح للتمنيع بحيوان المختبر.
تحضير مستضدات اشريكيا القولون السطحية:
1- مزروع طري من E.coli على اكار مائل او طبق.
2- يضاف 5 مل محلول ملحي فسيولوجي ويجرف بالعروة النمو مع المحلول الملحي ويوضع في انبوبة منبذ معقمة.
3- ينبذ في المنبذ لمدة 10 دقيقة عند سرعة 3000 دوره/دقبقية ثم يغسل بمحلول فسيولوجي معقم ثلاث مرات.
4- توضع الانابيب في الحمام المائي عند درجة 60 م لمدة ساعة.
5- افحص العقمة بتخطيط طبق اكارمغذي . عدم نمو البكتريا يعني ان التحضير سليم ووجود النمو يدل على ووجود تلوث.
حساب عدد وحدات المستضد بوحدة الحجم:
تحسب عدد وحدات المستضد بالمقارنة المرئية مع انبوبة ماكفرلاند او مع انبوبة منظمة الصحة الدولية القياسية او بطريقة المطياف.
انبوبة ماكفرلاند
Value 10n cells 1%H2SO4 1%BaCl2 Tube
300 9.9 0.1 1
600 9.8 0.2 2
900 9.7 0.3 3
1200 9.6 0.4 4
1500 9.5 0.5 5
1800 9.4 0.6 6
2100 9.3 0.7 7
2400 9.2 0.8 8
2700 9.1 0.9 9
3000 9.0 1.0 10