تأثير طرائق الاستخلاص المتعددة في كميةمتعدد بيتا هيدروكسي بيوتاريت (PHB)المستخلص من بكتريا Burkholderia cepacia وتأثيرها في وزنه الجزيئي

تشكل خطوة استخلاص وتنقية PHB خطوة مكملة للانتاج وتضيف هذه الخطوة كلفة لعملية الانتاج الى جانب كلف الاوساط الزرعية ومتطلبات عمليات الانتاج. وفي العقدين الماضيين بحثت ودرست عدة طرائق استخلاص المادة لغرض ايجاد طريقة اقتصادية تفي بالغرض.

هنالك عدة طرائق لاستخلاص متعدد بيتا هيدروكسي بيوتاريت تشمل:

1. الاستخلاص بالمذيبات Solvent extraction.
2. الهضم بهايبوكلورات الصوديوم hypochlorite digestion.
3. الهضم بالانزيمات Enzymatic digestion.

1. الاستخلاص بالمذيبات Solvent extraction.

          تستخدم هذه الطريقة اما على مستوى ضيق كما في التجارب المختبرية وعلى نطاق واسع لاغراض الانتاج التجاري ، وهي طريقة شائعة الاستعمال ويمكن تطبيقها على العديد من الاحياء المجهرية التي تنتج متعدد بيتا  هيدروكسي بيوتاريت.يذوب متعدد بيتا هيدروكسي بيوتاريت في المذيبات العضوية مثل الكلورفورم ومثيلين كلورايد و1، 2-ثنائي كلوريد الايثان( 1,2-dichloroethane) وهذه المذيبات الثلاثة تستخدم لاستخلاص متعدد بيتا هيدروكسي بيوتاريت من الكتلة الحيوية للبكتريا.

          ان طريقة استخلاص متعدد بيتا هيدروكسي بيوتاريت بالكلورفورم بمعاملته بالكلورفورم الساخن، وفصل المتعدد عن باقي الدهون بواسطة الترسيب مع ثنائي اثيل ايثر او الهكسان او الميثانول وغيرها واعيد اذابة متعدد بيتا هيدروكسي بيوتاريت في الكلورفورم(Doi,1990).

استخدمت ثلاثة مذيبات مكلورة مختلفة وهي الكلورفورم وكلوريد المثيلين و1،2-ثنائي كلوريد الايثان وقد حصل على احسن طريقة للاستخلاصه عند استخدام الكلوفورم وكلوريد المثيلين و1،2- ثنائي كلوريد الايثان على التواليet al.1994) Ramsay)

2. الهضم باستخدام هايبوكلورات الصوديوم

          يؤدي هايبوكلورات الصوديوم الى اذابة جميع المكونات الخلوية ماعدا متعدد هيدروكسي الكانوتيز أي انه يترك متعدد بيتا هيدروكسي بيوتاريت سليماً بدون تغير. وهضم الكتلة الحيوية بهايبوكلورات الصوديوم يؤدى  الى حدوث نقصان في الوزن الجزيئي يقارب 50% من البوليمر(1989 . et al (  Berger

          استخلص متعدد بيتا هيدروكسي بيوتاريت من بكتريا R.eutropha بطريقة الهضم بهايبوكلورايت تسبقه معاملة اولية بمادة ماسخة مثل (Sodium dodecyl sulfate) (SDS) الدي يزيل 85% من البروتين 10% بواسطة الهضم بهايبوكلورات الصوديوم. في هذه الطريقة تم الحصول على وزن جزيئي عالي للبوليمر. وبهذه الطريقة يمكن المحافظة على حبيبات متعدد هيدروكسي بيوتاريت مما يتيح استخدامها في عدة مجالات.( Ramsay et al. 1990)

3. طريقة الهضم بالانزيمات

          بسبب الكلفة العالية لطريقة الاستخلاص بالمذيبات استبدلت بطريقة الهضم بالانزيمات وطورت من قبل شركة Imperial Chemical Industeries (ICI)  تتضمن الطريقة الخطوات الاتية: معاملة حرارية بدرجة تتراوح بين 100-150°م لتكسير الخلايا ومسخ الاحماض النووية ثم الهضم بالانزيمات والغسل باستخدام المنظفات الايونية السالبة (anionic surfactant ) لاذابة المكونات الخلوية ماعدا متعدد بيتا هيدروكسي بيوتاريت وفي النهاية قصر متعدد بيتا هيدروكسي بيوتاريت مع بيروكسيد الهيدروجين . ان الانزيمات التي تستخدم في الهضم هي اللايسوزايم وفوسفورلايبيز phospholipase) ) ليسيتنز Licithinace ))والبروتيز(protease)، تعمل هذه الانزيمات على هضم اغلب المكونات الخلوية ماعدا متعدد بيتا هيدروكسي بيوتاريت الذي يبقى سليماً.