ناقش قسم علوم الحياة رسالة الماجستير للطالبة رفل حسين عبدعلي الموسومة ((الفعالية المضادة للسرطان لبذور نبات الخردل الاسود (Brassica nigra L.) ضد الخطوط الخلوية MDCK,SW480,KYS-30)) باشراف الدكتور علي حمود السعدي و الدكتورة ازهار حمزة حسنتم تنفيذ التطبيق العملي للدراسة البحثية في مختبر خطوط الخلايا ومختبر أبحاث طلبة الدراسات العليا / قسم علوم الحياة / كلية العلوم / جامعة بابل خلال الفترة من تشرين الأول 2023 – أيار 2024.هدفت الدراسة الحالية إلى تقييم تأثير السمية الخلوية لمستخلصات بذور الخردل الأسود (المائي والايثانولي و الايزوبروبانولي ) على خط خلايا MDCK الطبيعية وخط خلايا سرطان القولون SW480 وخط خلايا سرطان المريء KYS-30 وتقييم تأثير الجمع بين المستخلصات النباتية والأدوية المضادة للسرطان على خطوط الخلايا السرطانية. وتم قياس موت الخلايا المبرمج عن طريق قياس نشاط caspase-3 لتقييم التأثير المسبب لموت الخلايا المبرمج على خط خلايا سرطان القولون SW480 .تم توصيف المستخلصات لبذور نبات الخردل الأسود باستخدام الكشوفات النوعية وكروماتوغرافيا الطبقة الرقيقة وكروماتوغرافيا الغاز ومطياف الكتلة (GC-MS)وفقا للتحليل الكيميائي النباتي النوعي وجد ان القلويدات والمركبات الفينولية و الفلافونويدات والتربينات جميعها موجودة في مستخلصات البذور. بالإضافة إلى ذلك، أشار تحليل GC-MS إلى وجود العديد من المركبات المضادة للسرطان مثل حمض الأوكتاديكادينويك، توكوفيرول، ستيجماستيرول، حمض الإيكوسانويك. بالنسبة لتقييم السمية الخلوية، تم زرع خطوط الخلايا MDCK وSW480 و KYS-30 في طبق يحتوي 96 حفرة وتم معاملتها بمستخلصات بذور الخردل عند التراكيز (1000, 500, 250, 125, 62.5, 31.25) µg/ml لكل مستخلص وحضنت لمدة 48 ساعة. بعد ذلك، تم إجراء فحص الانتهاك البلوري لقياس حيوية الخلايا crystal violate test .فيما يتعلق بنتائج السمية الخلوية لخط الخلايا MDCK أظهرت النتائج انخفاض معنوي (P ? 0.05) في حيوية الخلايا عند استخدام المستخلص المائي لبذور نبات الخردل الاسود بتراكيز 1000 and 500 µg/ml وانخفاض معنوي (P ? 0.001) في حيوية الخلايا من خلال استخدام المستخلص الإيثانولي بتراكيز 1000 and 500 µg/ml .بينما لم يظهر مستخلص الأيزوبروبانول اي انخفاض معنوي في حيوية الخلايا مقارنة بمجموعة السيطرة بعد الحضانة لمدة 48 ساعة.عند معاملة خلايا سرطان القولون SW480 بتراكيز متسلسلة(31.25-1000) µg/ml من مستخلصات بذورالخردل الاسود المختلفة،. أظهرت النتائج أن جميع مستخلصات بذور الخردل الاسود وحدها لم يكن لها أي تأثير سام للخلايا على خط خلايا سرطان القولون SW480 عند كل التراكيز.
في حين أظهر التأثير المشترك لدمج عقار الفلورويوراسيل µg/ml IC50(43) مع المستخلص المائي لبذور الخردل الاسود على خط خلايا سرطان القولون SW480 انخفاضاً معنويا (P? 0.001) في قابلية الخلايا للنمو عند التراكيز(500 ,62.5 ,31.25 ) µg/ml و انخفاض معنوي (P ? 0.05) في حيوية الخلايا عند التراكيز(1000, 250 ,125) µg/ml مقارنة بمجموعة السيطرة بعد الحضانة لمدة 48 ساعة. بالنسبة للمستخلص الإيثانولي أظهرت نتائج الدمج مع عقار الفلورويوراسيل انخفاضاً معنوياً (P? 0.05) في حيوية الخلايا عند التركيز31 µg/ml وانخفاضاً معنوياً (P ? 0.05) في حيوية الخلايا مع مستخلص الأيزوبروبانول عند دمجه مع العقار بتركيز1000 µg/ml مقارنة بمجموعة السيطرة بعد الحضانة لمدة 48ساعة. أَمَا بالنسبة لخط خلايا سرطان المريء KYS-30، لم يكن للمستخلص المائي لبذور الخردل الاسود أي تأثير سام للخلايا في جميع التراكيز. بينما أظهرت النتائج عند استخدام المستخلص الإيثانولي لبذور الخردل الاسود انخفاضاً معنوياً (P? 0.001) في حيوية الخلايا عند التركيزين (1000 and 500) µg/ml وانخفاضاً معنوياً (P ? 0.05) في حيوية الخلايا عند التركيزين (250 and 125) µg/ml . وبالنسبة لمستخلص الأيزوبروبانول أظهرت النتائج انخفاضا معنويا (P ? 0.05)في حيوية الخلايا عند تركيز1000 µg/ml بعد الحضانة لمدة 48 ساعة، في حين لم تظهر التراكيز الأخرى انخفاضا معنويا في حيوية الخلايا مقارنة بمجموعة السيطرة. اظهرتأثير الجمع لـعقار السيسبلاتين ug/ml(IC50(40 مع المستخلص المائي لبذور الخردل الاسود على خلايا KYS-30 انخفاضاً معنوياً (P? 0.001) في حيوية الخلايا مع كل التراكيز، وبالنسبة للدمج مع المستخلص الإيثانولي أظهرت النتيجة انخفاض معنوي (P ? 0.001) في حيوية الخلايا مع جميع التراكيز بينما بالنسبة لمستخلص الأيزوبروبانول أظهرت النتائج انخفاضاً معنوياً (P ? 0.001) في حيوية الخلايا مع التراكيز(31,62,125 ,250) µg/ml وانخفاض معنوي (P ? 0.05) في حيوية الخلايا عند التراكيز(500,1000) µg/ml مقارنة بمجموعة السيطرة بعد الحضانة لمدة 48 ساعة.من خلال فحص الموت الخلوي المبرمج لخلايا سرطان القولون عن طرق قياس مستويات caspase -3 ,اظهرت نتيجة فحص الاليزا إن دمج المستخلص المائي مع عقار الفلورويوراسيل بتركيز250??g/ml تعطي أعلى قيمة لنشاطcaspase-3، قدرها 0.384752 ng/ml مقارنة بتراكيزه عند استخدام المستخلص المائي وعقارالفلورويوراسيل بمفردها. حيث كانت ? 0.118723 ng/ml و 0.226454 ?ng/ml على التوالي.
من خلال هذه الدراسة نلاحظ إن استخدام مستخلصات بذور الخردل بمفردها وبالاشتراك مع الدواء يمكن أن يقلل من نمو الخلايا السرطانية وكان تأثيرها على خط خلايا سرطان المريء KYS-30 أكثر كفاءة من خط خلايا سرطان القولون ,SW480وان مستخلص الايزوبروبانول لبذور الخردل كان اكثر كفاءة مقارنة بباقي المستخلصات حيث تعود فعاليته الى احتواءه على اكبر عدد من المركبات المضادة للسرطان نتيجة تحليلها بال GC-MS . وان الجمع بين المستخلص المائي والدواء يمكن أن يحفز موت الخلايا المبرمج في خط خلايا سرطان القولون SW480 عن طريق زيادة نشاط caspase-3في الخلايا.