مناقشة اطروحة دكتوراه في قسم علوم الحياة حول نبات الديباج
جرت في قسم علوم الحياة مناقشة اطروحة الطالبة اسراء عبد الامام عبد الزهرة بعنوان:
الفعالية المضادة للسرطان للمستخلص الايثانولي لنبات الديباجCalotropis procera L. و تأثيره على التعبير الجيني لبعض جينات الموت الخلوي المبرمج في بعض خطوط خلايا سرطان الانسان
وقد تألفت اعضاء لجنة المناقشة من:
أ.د. بشير عبد الحمزة محمد رئيساً ( جامعة بابل /كلية العلوم /علوم الحياة / نبات )
أ.د. محمد عبد الله جبر عضواً ( جامعة بابل /كلية العلوم /علوم الحياة / التقنيات الاحيائية تقنيات )
أ.د. شيماء محي حسون عضواً ( جامعة بابل / كلية العلوم/ علوم الحياة / نبات )
أ.م.د. احمد فاضل نعمة عضواً ( جامعة النهرين/ مركز التقانات الاحيائية / تقانة احيائية / وراثة خلوية)
أ.د. ولاء صالح حسن عضواً ( جامعة بابل / كلية العلوم / علوم الحياة / الحيوان )
أ.د. فادية حميد محمد عضواً و مشرفاً ( جامعة بابل/ كلية العلوم /علوم الحياة / نباتات طبية )
أ. د. هالة محي ناجي عضواً و مشرفاً ( جامعة بابل/ كلية العلوم / علوم الحياة / الحيوان )

اذ هدفت الدراسة لمعرفة المكونات الكيميائية النباتية والفعالية المضادة للأكسدة لمستخلص أزهار نبات الديباج Calotropis procera L. ، وتقييم الفعالية السمية و المضادة للسرطان في كل من الخطوط الخلوية لسرطان العظم البشري MG 63 وورم الدماغ البشري A172 بالإضافة إلى تحديد ميكانيكية الفعل لهذا المستخلص على الجين المؤيد لموت الخلايا المبرمج P53 والجين المضاد لموت الخلايا المبرمج Bcl-2 .و تضمنت الدراسة تحضير مستخلص أزهار C. procera L. باستخدام 70% إيثانول، وتم الكشف عن وجود العديد من مجموعات مركبات الايض الثانوي من خلال اختبار الكشف الاولي عن المركبات الكيميائية النباتية. وتم تقييم وجود وتركيز بعض المركبات الكيميائية النباتية المضادة للأكسدة والسرطان والتي تضمنت : (حمض السيناميك، وحمض الروزمارينيك، وبيتا-أميرين، وستيغماستيرول) باستخدام تقنية HPLC. كما تم تقييم النشاط المضاد للأكسدة لهذا المستخلص من خلال اختبار الفعالية الاقتناصية لجزيئات الجذر الحر 2,2- ثنائي فينيل-1- بيكريل هيدرازيل DPPH) (
تم التحقق من النشاط السام للمستخلص على نوعين من خطوط خلايا السرطان البشرية : الخطوط الخلوية لسرطان العظم البشري ) MG 63 (وورم الدماغ البشري A172 ،بالإضافة إلى الخلايا الطبيعية (HdFn)، باستخدام اختبار MTT. بعد ذلك تم اجراء فحص المحتوى العالي متعدد المعايير للكشف عن نشاط المستخلص في: عدد الخلايا الحية ، والكثافة النووية الكلية، ونفاذية غشاء الخلية، وجهد غشاء الميتوكوندريا، وإطلاق السيتوكروم سي، باستخدام اختبار HCS، على خط الخلايا الأكثر حساسية (MG63). ومن ثم تم تقييم فعالية المستخلص في استحثاث الإجهاد الأكسدي في خلايا سرطان العظم MG63 البشرية من خلال قياس مستويات الجذور الحرة لأنواع الأوكسجين التفاعلية (ROS).
تم تقييم قدرة المستخلص على تحفيز موت الخلايا المبرمج في خطوط خلايا سرطان العظام البشرية MG63 عن طريق قياس مستويات كاسبيز-8 وكاسبيز- 9 في الميتوكوندريا لخلايا سرطان MG63 .
تم الكشف عن النشاط المضاد للسرطان للمستخلص على المستوى الجزيئي من خلال التحري عن تأثيره على التعبير الجيني لبعض الجينات المرتبطة بالسرطان والتي تضمنت : p53 و Bcl-2
تؤكد نتائج الاختبارات الكيميائية النباتية الأولية وجود جميع المركبات الكيميائية النباتية التي تم اختبارها والتي تضمنت : الفينولات، الفلافونويدات، التانينات، الكومارينات، الجليكوسيدات، القلويدات، التربينات، الصابونين، الراتنج، الكربوهيدرات والزيوت العطرية.
لقد أكدت نتائج تحليل HPLC وجود كلا من : حمض السيناميك، بيتا-امايرين، حمض الروزمارينيك والستيكماستيرول وبالتراكيز : (3093.75 , 6443, 8693 ,13440) جزء في المليون على التوالي .
أظهرت نتائج اختبار (DPPH) نشاطاً اقتناصيا يعتمد على تركيز المستخلص في إزالة الجذور الحرة ، حيث بلغ أعلى تأثير %86 في التركيز 200 مايكروغرام/ مل مع IC50 بمقدار 35.86 مايكروغرام/ مل.
أظهرت نتائج اختبار MTT أن تحضين خلايا MG63 وA172 وHdFn مع مستخلص الزهور بالتراكيز(200, 100, 50, 25) مايكروغرام / مل لمدة 24 ساعة عن زيادة معنوية في نسبة تثبيط الخلاياازدادت بزيادة الجرعة ، حيث كانت قيم IC50 149.23)، 190.67، 934.98) ميكروغرام/مل على التوالي.ولقد اظهر المستخلص نشاطًا انتقائيًا ساماً للخلايا السرطانية قياسا بخلايا HdFn الطبيعية.
أظهرت نتائج الفحص عالي المحتوى (HCS) أن 200 ميكروغرام / مل من مستخلص C. procera L. كان له أفضل تأثير معنوي (p <0.05) على جميع المعاييروالتي تضمنت (عدد الخلايا الحية ، والكثافة النووية الكلية، ونفاذية غشاء الخلية، وجهد غشاء الميتوكوندريا، وإطلاق السيتوكروم سي) للخط الخلوي السرطاني MG 63 قياسا بعينة السيطرة .
كشفت نتائج استحثاث الإجهاد التأكسدي بواسطة المستخلص في الخلايا السرطانية MG 63 أن كلا من التركيز 100 و 200مايكروغرام/مل من مستخلص C. procera L. أظهر زيادة كبيرة في توليد ROS والتي بلغت ((734 ,621 RFU قياسا بخلايا MG63 غير المعالجة والتي بلغت (432) RFU.
أظهرت النتائج قدرة المستخلص على تحفيز الموت المبرمج في خلايا سرطان العظم البشرية MG63 وذلك من خلال رفع النشاط الانزيمي لكل من كاسبيز- 8 وكاسبيز- 9. وقد زادت هذه القدرة بزيادة التركيز ، اذ بلغت اعلى مستوياتها عند التركيز 200 ميكروغرام/مل لكل من كاسبيز -8 وكاسبيز -9 ، اذ ارتفع النشاط الانزيمي للانزيمين إلى (67182, 33605.33) وحدة دولية على التوالي.
أظهرت نتائج الدراسة الجزيئية تأثيراً معنوياً معتمداً على الجرعة لمستخلص C. procera L. في زيادة التعبير الجيني للجين p53 ليصل إلى (8.17) فولد في التركيز (200) ميكروغرام/مل وفي خفض التعبير الجيني للجين Bcl-2 ليصل إلى (0.1487) فولد في التركيز (200) ميكروغرام/مل.
نستنتج من خلال نتائج هذه الدراسة بان المستخلص الإيثانولي لأزهار نبات الديباج C. procera L. مضادًا قوياً للأكسدة وغنيًا بالعديد من المركبات الكيميائية النباتية، وقد بينت النتائج بان للمستخلص نشاطًا مضادًا للسرطان وسامًا على كل من خطوط خلايا سرطان العظم البشري MG63 وورم الدماغ البشري A172 ، وكانت خلايا سرطان العظم MG63 أكثر حساسية للمستخلص قياسا بخلايا ورم الدماغ البشري A172 ، في حين لم يظهر المستخلص تاثيرا سميا معنويا على الخلايا الطبيعية HdFn . ان النشاط المضاد للسرطان والسام للخلايا السرطانية في هذا المستخلص وبناء على اوضحته النتائج يعود إلى قدرة المستخلص على زيادة نفاذية غشاء الميتوكوندريا، وتحفيز الإجهاد التأكسدي في الخلايا السرطانية ، وتحفيز كل من مسارات موت الخلايا المبرمج الداخلية والخارجية عن طريق زيادة نشاط كاسبيز -8 وكاسبيز -9 . بالإضافة الى قابلية هذا المستخلص على رفع مستوى التعبير الجيني للجين المؤيد لموت الخلايا المبرمج p53 وخفض مستوى التعبير الجيني للجين المضاد لموت الخلايا المبرمج Bcl-2 في خلايا سرطان العظم البشري MG63.